https://www.nature.com/articles/s41586-026-10460-4 

靶向插入大片段DNA在基因组工程和基因治疗领域具有广阔的应用前景 1,2  。双引物编辑引导RNA（Twin Prime Editing guide RNA）能够实现相对较大的插入，但对于大于400个碱基对的插入，其效率仍然较低 3,4,5,6  。本文介绍了一种用于插入大片段DNA供体片段的引物组装（PA）方法，该方法设计的片段末端与双引物编辑（twinPE）产生的片段重叠。我们利用PA方法插入了一个或多个重叠的DNA片段，总插入片段大小范围为0.1 kb至11 kb。非同源末端连接（NHEJ）抑制剂提高了插入的效率和精确度。PA方法依赖于易于制备的DNA模板，无需共递送外源DNA依赖性DNA聚合酶，并且可在非增殖细胞中进行，这表明其不依赖于经典的同源定向修复途径。我们的研究表明，P...